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相差显微镜的使用流程

日期: 2019-09-30
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1、相差物镜的调换安装

从物镜转换器上拆下普通物镜,旋入相差物镜,与普通目镜配套使用。

 

2、转盘聚光器的调换安装

旋转聚光器升降螺旋,把普通明视场聚光器至最低位,旋松固紧螺丝,卸下聚光器。把转盘聚光器安放到相应位置上,旋紧固紧螺丝,转动聚光器升降螺旋,使聚光器升至最高位置。转盘聚光器的标示孔,朝向操作者。此时,转盘聚光器上面的聚光镜部分,进入光路;下面的环状光阑转盘,可视需要转动使用,把与物镜匹配的环孔旋入光路,使之处于转盘聚光镜下。

 

3、把绿色滤色镜放入镜座的滤色镜架上

转盘聚光器调换安装后,要进行合轴调中,使聚光器的光轴与显微镜的主光轴合一。其步聚如下:

 

(1)把转盘聚光器的环状光阑调至“0”位,明视场照明的普通可变光阑进入光路。

 

(2)旋转聚光器升降螺旋,聚光器升至最高位。

 

(3)接通照明光源,使视场明亮。

 

(4)把被检样品放到载物台上,用低倍(4×)物镜聚焦。

 

(5)缩小镜座上的视场光阑开孔,至最小。

 

(6)从目镜观察,在暗视场中可见一缩小的、明亮的、多角形的视场光阑图像。

 

(7)转动转盘聚光器的两个调中杆,推动聚光器,把视场中的明亮的多角形的视场光阑图像,调至视场中央。

 

(8)开放视场光阑至视场同大,视两者周边是否完全重合;否则,复用调中螺杆,使聚光器精神调中。

 

4、相板圆环与环状光阑圆环的合轴调中

相差物镜的后焦面装有相板。按物镜放大率与反差效果的不同,相板圆环(共轭面)的大小与结构亦不同。转盘聚光器的环状光阑为一系列的透光的,不同大小的明亮环孔,与不同放大率的物镜相应。使用时严格匹配,当物镜更换时,环状光阑亦作相应的更换或调整。

在视场中观察所见,环状光阑为一明亮的圆环,而相板的圆环为一暗环。互相匹配的明环与暗环大小一致。在使用时两者要合轴,互相重叠。两环的重叠,须通过合轴调节方能取得。其方法如下:

 

(1)相差物镜与环状光阑的匹配:正确地匹配取决于所用物镜放大率。例如,当使用40×相差物镜时,环状光阑转向ph3或40位,使相应地环状光阑进入光路。

 

(2)把CT放入目镜筒:从目镜筒取出一个目镜,换入调中合轴望远镜(CT)。CT为一眼透镜,也是可行升降调节的望远目镜,专为观察视场中明环与暗环图像之用。因为用一般目镜看不见两环的清晰图像。CT在使用前眼透镜应处于最低位,即CT为最短小的状态。

 

(3)明环与暗环的聚焦:一手固定位于目镜筒中的CT镜筒,使其透镜位置不能上移,另一手逆时针转到CT上部可调的眼透镜部分。转动的同时,通过CT向现场中观察,即国旋转边观察初始,两环可能为模糊的图像,继续转动CT目镜可调部分至清晰地窥见明环与暗环止。

 

(4)明环与暗环的调中重叠:相板的暗环是固定不动的,处于光路之中,暗环的中心,即显微镜光轴的中心。环状光阑的亮环可调节移动。转盘聚光器环状光阑的位置,因聚光器的可调其中心位置,往往偏离光轴轴心,需调整,使其归中。环状光阑的调中装置或部件,因厂家或型号的不同而有别。如OLYMPUS BH2-PC型相差显微镜,环状光阑调中装置为位于转盘聚光器两侧的两个伸丝自如的调中螺杆,用以操纵改换环状光阑的方位,达到调中;而Nikon FIVORPHOT型显微镜的相差装置,其环状光阑的调中部件为位于转盘聚光器表面,可向任一方向滑动的环状钮。调中时,手指调中装置,移动明环,使之与暗环合一。在两环调中过程,始终在通过CT的观察下进行。

在调节过程中,如亮环比暗环小,并位于暗环内侧时,应降低聚光器位置,使亮环放大。若亮环大于暗环时,应提升聚光器,使亮环缩小。如聚光器已升至最顶点还不能完全重合,可能是载玻片过厚之故。

 

(5)回装观察目镜:待相差物镜的暗环与环状光阑的亮环调中、重叠后,从目镜筒中取出CT,放回观察用的接目镜,以便镜检观察。

 

5、相差物镜的选择

相差物镜有不同倍率、不同反差类别和反差程度之分。相差物镜的反差类别和反差程度以及放大倍数,皆用英文字母和数字标示在物镜壳中。例如:

20×PH=20倍,正反差,反差程度高。

20×PM=40倍,正反差,反差程度中等。

100×PL=100倍,正反差,反差程度低。

40×NH=40倍,负反差,反差程度高。

40×NM=40倍,负反差,反差程度中等。

100×NL=100倍,负反差,反差程度低。

100×DH=100倍,暗反差,反差程度高。

40×DM=40倍,暗反差,反差程度中等。

20×DL=20倍,暗反差,反差程度低。

10×BH=10倍,明反差,反差程度高。

20×BM=20倍,明反差,反差程度中等。

40×BL=40倍,明反差,反差程度低。

相差镜检时,依被检样品的种类、结构和反差程度的不同,而确定应选用相差物镜的种类。这不存在死硬的规定,可依观察者的习惯和爱好而变。一般来说,相差物镜的应用范围如表1-1。

就某一具体被检物体来说,适于明反差或适于暗反差,难以定论。通常是哪一种相差物镜都能得到清晰的像,只是有的物镜更好些而已,因此可任意选择。有的样品只适于某一种相差物镜。暗反差物镜对习惯于明视场境检者很适宜。当与染色标本进行比较或进行测定以及加强半透明物体的反差时,多用暗反差;而计算数量或观察物体运动以及研究极小的样品时,多使用明反差。

                                         表1-1  相差物镜应用范围

 字母

  反差

               应用

  P

   正

观察细胞或细胞核的内部结构

  N

   负

观察微小的物体如孢子、鞭毛和活的样品等

  H

   高

当样品反差较低时

  L

   低

当样品反差较高时

  M

   中

当样品反差为中等时

 

总之,在相差镜检时,于诸多的相差物镜中选一物镜,绝非易事。除参考上表所列应用范围外,最佳方法是通过各种类型的相差物镜进行实际镜检测定,找出最宜相差物镜。

 


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