注：我们常说的相衬显微镜,比较显微镜均指相差显微镜。相差显微镜由P·Zernike（采尔尼克）于1932年发明，并因此获1953年诺贝尔物理学奖。这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。我们知道，人眼只能区分光波的波长（颜色）和振幅（亮度），对于无色透明的生物标本，当光线通过时，波长和振幅变化不大，在明场观察时很难观察到标本。相差显微镜的基本原理是：把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。光线透过标本后发生折射，偏离了原来的光路，同时被延迟了1/4λ（波长），如果再增加或减少1/4λ，则光程差变为1/2λ，两束光合轴后干涉加强，振幅增大或减小，提高反差。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处：1、环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间，作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。2、相位板（annular phase plate）：在物镜中加了镀有特殊膜层（如氟化镁、硫化锌与铬等）的相位板，可将直射光在规定的区域内通过，且被吸收掉大量的光能量，使直射光的振幅衰减至与衍射光振幅相当，同时改变某一个位相差，分为两种：（1）A+相板：将衍射光的相位推迟1/4λ（90°），两组光波合轴后光波相加，振幅加大，当标本折射率大于周围介质时，标本图像比背景暗，...
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2019
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阿贝聚光镜（Abbe condenser）由德国光学大学大师恩斯特·阿贝（Ernst Abbe）(蔡司公司的创始人之一)设计。阿贝聚光镜由两片透镜组成，有较好的聚光能力，但是在物镜数值孔径高于0.60时，则色差，球差就显示出来。因此，多用于普通显微镜上。传统显微镜的聚光镜，一般由聚光镜和光阑组成。聚光镜支架以齿条、齿轮衔接的导轨连接在显微镜镜臂下端，位于载物台下方；侧方有调节旋钮可做竖直方向上的升降调节；光阑多用调节孔径大小。聚光镜多由2~3片透镜组成，前端透镜即面向物镜的透镜上面为平面，这种聚光镜的NA值（镜口率）是固定不变的，有些可以更换不同NA值的前透镜，以与不同NA值物镜相匹配。
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消色差聚光镜（Achromatic aplanatic condenser）这种聚光镜又名“消色差消球差聚光镜”和“齐明聚光镜”，它由一系列透镜组成，它对色差球差的校正程度很高，能得到理想的图像，是明场镜检中质量最高的一种聚光镜，其NA值达1.4。因此，在高级研究显微镜常配有此种聚光镜。它不适用于4X以下的低倍物镜，否则照明光源不能充满整个视场。
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荧光显微镜使用方法和操作规程：1.用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。2.将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。3.打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。4.灯泡的调中：（1）任选一块标本放在载物台上；（2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路，并将10X荧光物镜转入光路；（3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰；（4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大；（5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰；（6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中；（7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开；（8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，...
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Q：荧光显微镜灯泡的寿命有多少？A：汞灯使用注意事项：目前通常使用的为50W超高气压汞灯，灯管内通有一对钨电极和液态汞（室温下附在管壁上），未点燃时，管内气压很低，在灯管的两电极间施加电压点燃后，汞气化为汞蒸汽形成汞弧而产生强光，温度升高，管内气压迅速升到10个大气压。由于是高气压的气体放电，必须了解其特性才能安全地使用汞灯。以下来自百度搜索： a.汞灯接通电源后需要10-15min预热时间，汞才能充分汽化并形成汞弧，产生高亮度而稳定的激发光。因此，观察前要提早通电；b.汞灯在使用过程中，不要随意开关汞灯的电源； c.关掉汞灯电源后，必须等待15-20min，待汞灯自然冷却后才可再次接通电源，违反这一操作规定时，将会造成严重后果！由于汞灯内的汞蒸气未完全液化，汞蒸气内阻很小，一旦通电在两电极间施加电压，汞灯内形成强大的电流，轻则烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈，重则汞灯爆炸，汞蒸气弥漫整个实验室，造成工作人员中毒，不仅损失了汞灯，还会炸毁灯室内的集光-聚光部件。 d.汞灯的使用寿命一般只有300h，使用得当可达600h，使用寿命与开关的次数成反比，应集中一批样品作2-3h的观察。汞灯价格昂贵，应珍惜使用。e.汞灯寿命终结的标志是点燃困难，灯管发黑。
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1、吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。 2、EB：染色DNA和RNA。 3、荧光素双醋酸酯(FDA)：FAD 本身无荧光,无极性，可透过完整的原生质膜。一旦进入原生质体后，由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光，无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA溶于1ml丙酮中，避光4℃下贮存，使用时取0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中。使用时，使最终浓度为0.01%。 4、荧光染料Ho33342和若丹明123：活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。
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